细胞存活率检测步骤

细胞活性检测旨在了解细胞的生存状态活性，是否适合做后续的实验，在病毒转染实验中细胞活性差也是转染不成功的因素之一，其次用于药物研究，对活细胞进行药物研究，是对最小生命体的研究扩展到对整个机体的功能药物特征的了解，那么细胞活性检测怎么做？以下是我们技术整理的文稿之一，关注启达生物，实验操作不迷路:

该操作步骤采用PicoGreen 96孔板技术。该方法用于评估不同肿瘤细胞系对化疗药物的敏感性。

试剂

含有10%FBS的培养基

PicoGreen

TryLE express（胰蛋白酶）(启达生物，货号：SD0003)

磷酸盐缓冲盐水（PBS）(启达生物，货号：SD0029)

去离子水

耗材

96孔培养板

TECAN Genios仪器（PHENIX）

恒温箱

金属薄片

分光光度计

1. 吸出培养基，用5 ml PBS洗涤一次。加入2ml tryLE express。细胞分离后，加入10ml完全培养基。用5-10毫升移液管移取细胞悬浮液，制成单细胞悬浮液。这一步骤非常重要（要获得单细胞悬浮液，请将移液管尖端放在培养瓶底部，然后通过将细胞悬浮液从移液管中挤出来推出细胞悬浮液）。

2. 计数细胞并稀释至1 x 10^5/ml，将细胞置于100μl（1 x10^3/孔）的96孔板中。

3. 将感兴趣的药物稀释成一系列浓度，并以100μl的量加入孔中（药物按最终浓度的2倍制备）。

4. 将孔板放在37°C、5%二氧化碳的环境中培养1周，其间需要按正常换液次数换液

轻轻吸掉孔板培养基。然后擦拭以去除剩余的培养基。

5. 用PBS 200μl/孔洗涤两次。通过摇动孔板轻轻擦拭除去PBS。

6. 向每个孔中加入100μl去离子水。将培养板放入37°C、5%CO2的培养箱中1小时。

7.在去离子水中以1:200稀释PicoGreen（需要100μl/孔）。一定要计算出你需要多少。用箔纸包裹盘子，在室温下静置1小时（如果你很忙，这一步可以在一夜之间完成）。

8. 用分光光度计测量板的荧光强度。

处理数据：

存活率=实验孔的平均荧光强度x 100%

对照井中的平均荧光强度

注：PicoGreen是一种选择性结合dsDNA的荧光染料，其特性与SYBR Green I类似。它在480 nm处具有最大激发，在520 nm处具有发射。

References/参考文献：

1. Ahn, S. J., Costa, J. and Emanuel, J. R. (1996). PicoGreen quantitation of DNA: effective evaluation of samples pre- or post-PCR. Nucleic Acids Res 24(13): 2623-2625.

2. Enger, O. (1996). Use of the fluorescent dye PicoGreen for quantification of PCR products after agarose gel electrophoresis. Biotechniques 21(3): 372-374.