protocol：THP-1细胞怎么分化M1和M2

THP-1细胞，这是一种可以分化为巨噬细胞的人类白血病单核细胞系。这允许在无直接细胞接触交互作用的情况下，研究巨噬细胞分泌体对共培养癌症细胞的影响（例如，对生长、药物反应或基因表达的影响），体外THP-1单核细胞分化为极化巨噬细胞用于研究M1和M2型巨噬细胞群体对其他细胞的影响，M1型巨噬细胞通常被认为是抑制肿瘤的，而M2型巨噬细胞被认为具有组织修复和肿瘤生长促进活性，因此thp-1拥有的两极分化是很多实验的关键，以下是THP-1分化实验步骤，点赞收藏，细胞实验不迷路。

准备材料：
Transwell inserts 0.4 μM ，THP细胞（启达生物货号：CD0122)，1640含有10%FBS的正常培养基（启达生物 ，货号：MD0201），IL4、IL13、IFN-γ储备溶液、PMA（见实验步骤）LPS（见实验步骤）

实验试剂制备：

IL4原液、IL13原液、IFN-γ储备溶液配制：在PBS含有0.05%BSA中制成100ug/ml，分装并于-80°保存；使用时：在无菌PBS中稀释至40µg/µl的浓度，然后等分并在-20°C下储存

脂多糖:在无菌PBS中稀释至40µg/µl的浓度，然后等分并在-20°C下储存

实验步骤：

Day 1:

1. THP-1细胞在RPMI/FCS培养基中悬浮生长，一旦接种到transwell插入物中就进行激活。使用手套在插入物的无菌边缘处理插入物。

2.使用血细胞仪对THP-1细胞进行计数，制成浓度为1×105个细胞/ml的细胞悬浮液。

3.然后通过每6个孔加入2ml RPMI/FCS培养基来制备一个6孔板。然后将transwell插入物放入含有2ml培养基的6孔中。

4.将2ml THP-1细胞悬浮液加入到插入物中（2x105个细胞/插入物）。

5. THP-1细胞一旦沉淀，立即用10 ng/ml 12-O-十四烷酰基horbol-l3-乙酸酯（PMA）处理24小时（1µl储备溶液，总体积为4 ml）。

Day2：

1. 在PMA中活化的THP-1细胞24小时后在transwell插入物分化。

2. 通过添加2ml新鲜RPMI/FCS培养基来制备新的6孔板。

3. 然后从含有活化THP-1细胞的插入物中轻轻吸出含有PMA的培养基，并将插入物转移到新的6孔板上

4. 然后将2ml RPMI/FCS培养基加入插入物中，并在处理前放置1小时。

5. 然后用所需的细胞因子混合物处理插入物：

5.1. M1分化可以通过用15 ng/ml脂多糖（LPS）（1.5µl储备溶液转化为4ml）或50 ng/ml IFN-γ（2µl储备液转化为4ml）处理来实现。

5.2. M2分化可以通过用25 ng/ml IL4和25 ng/ml IL13（1µl储备溶液加入4 ml）联合处理来实现。

未分化但活化的THP-1细胞在插入物中未经处理以用作活化但未分化的单核细胞的参考孔。

在这个阶段，可以通过免疫荧光、ELISA或特异性标记物（如IL1、IL10、精氨酸酶）的基因表达分析来评估向M1和M2型巨噬细胞的正确分化。