

来源:启达生物 浏览量:668 发布时间:2023-10-12
提取的细胞不纯怎么办?按照下列方法进行磁珠筛选,轻松搞定细胞不纯的问题。
1.准备好磁珠和其他需要用到的试剂,所有分选试剂的储藏温度应该是2-8C。过低或过高的温度都会影响有效期,从而影响产品的使用效果;
2.提前预热试剂,所有的试剂和样本在使用之前都应该平衡到室温 (15-25C);
3.全部操作都应该在超净台或者生物安全柜内进行,室控制在15-20℃;
4.手动处理样本要求比较高的试验室操作技术和细心的操作。用 BeadRetriever 时将样本转移至试管的操作应该在距离已经准备好的样本至少 1米的区域进行;
5.磁珠使用前必须震荡混匀;
6.在处理极其粘稠或是含脂量很高的样本时.可以用到稀释。推荐使用特定的洗涤续冲液(PBS-Tween) 来稀释样本;
7.使用 360”旋转混合器来孵育磁珠。建议从头到底的旋转几次;
8.在室温下保持 10 分钟孵育时间。过多的孵育对靶细胞或靶分子的复原能力仅有轻微的提升,但却增大了非特异性结合的可能;
9.洗涤要彻底,而且要按照规定的次数进行;
10.轻微的混匀液体,而不是震荡摇匀。在加磁场之前,要确保磁珠适当的加到了滚液里;
11.当把磁珠集中在一个小球里的时候,用90°的 rock-n-roll 动作在特定的时间内对每个旋转进行 1/2 的操作;
12.小心的去处悬浮液。手工将液体吸出试管而不能空吸。从样本试管吸出磁珠后,因为这些液体要丢弃,所以会引起靶细胞或是靶分子的缺失;
13.额外的洗涤步骤可以减少背景干扰,但也会峰低靶细胞的回收效率;
14.如果考虑到背景污染,可以在每次洗涤步骤后更换离心管。很多微生物都可以粘到管壁上,更换可以减少脂质体污染。