一步搞定间充质干细胞诱导神经元细胞的Protocol

一步搞定间充质干细胞诱导神经元细胞的Protocol

离大谱：间充质干细胞还可以诱导成神经元细胞？Protocol我们技术都整理出来啦，就等着您来阅读啦！

先上培养基:

间充质干细胞诱导神经元细胞的操作步骤如下：

1. 准备好MSCM细胞培养基和细胞包被液（启达生物，货号：SD0044）

使用MSCM生长培养基，在用包被液包被过的培养瓶中接种间充质干细胞，接种密度为4000个/cm2。

2. 每1-2天换液一次，将细胞培养至80%的饱和度

下面我们准备诱导啦！

一、诱导间充质干细胞分化

使用干细胞神经分化培养基诱导培养，同时用MSCM生长培养基培养一个样本作为阴性对照。

以6孔板为例，当细胞到达80%以上的汇合度后立即开始诱导，

1. 将需要诱导细胞用D-PBS清洗两次，以去除生长培养基；

2. 每个孔加1ml左右的干细胞神经分化培养基打十字摇匀后置37°培养箱培养

3. 诱导至少培养3天，期间每48小时更换一次培养基。注意，诱导后1天就可能观察到细胞显著的形态学变化。

换液需注意的小事项:请沿孔壁慢慢滴入；若细胞背景干净请谨慎在细胞诱导期间用PBS冲洗细胞，容易造成细胞的脱落；

给同学们来组我们诱导的图片吧：（Rmsc-bm/SD大鼠骨髓间充质干细胞的诱导）

Day 1:Rmsc-bm细胞诱导前的汇合度

Day 3:RMSC-bm诱导的第三天

Day 8:RMSC-bm诱导的第八天

收获和验证细胞

神经元验证最简单的方法莫过于电击验证， 但是很多实验室没有电击材料，我们想出了一个好办法 ，买个打火机，把它点火的电池取下来 ，放细胞培养孔里轻轻一按，神经元细胞立马展现出它特有的收缩反应，此操作要注意按压的火力，要是电流过高，细胞就会噶了，此方法适合只是验证，不需要发大pepar的同学们 ，发大pepar的同学还是需要按部就班的来；

MSC来源的神经细胞可以选择性地根据“神经细胞标记物的检测”来进一步验证细胞的特征；经诱导后的MSC细胞 具有神经元的主要NeuN、Nestin、等神经元特异性蛋白表达；这里就要进行免疫荧光染色啦，有兴趣的同学可以翻看我们往期的文章有细胞免疫荧光染色操作的详细介绍哦，除此之外还需要进行WB验证。