细胞培养之真菌，细胞污染的防治

冬天已经过去了大半了 ，春天就要来了，实验室在一楼，地下室或者其他容易潮湿的地方的小盆友又要开始新一轮的防细胞污染大战了。

请遵守细胞污染永恒定律：无论什么细胞只要是不重要的细胞污染了，立刻加84弃之，重新复苏新冻存管培养；实在需要挽救的请参考以下：

细菌污染：主要有洋葱霍尔伯德菌型污染

确定是非常珍贵的细胞 建议分别配置含10倍庆大霉素和两性霉素溶液（G/A)的PBS和5倍庆大霉素和两性霉素溶液（G/A)的完全培养基各一份。然后先用10倍双抗的PBS洗涤细胞5-10次， 然后用5倍双抗的完全培养洗涤细胞3次以上,再加上含双倍的G/A溶液放培养箱培养，一个小时后换液，持续4个小时后，再加上正常培养细胞所需的抗生素，过夜，到最终确定细胞没有任何污染物，因此时细胞受损过大，建议优化培养基方式（血清提高2%-5%）或者立即冻存细胞，一个月后复苏。

真菌污染：

污染的多是曲霉菌，白色念珠菌，酵母菌，黑霉菌，孢子菌，真菌主要以预防为主，防治为辅，已经污染了，建议采用以下方法：

1. 细胞一旦污染，很难挽救，即使使用制霉菌素或放线菌素D，也是伤敌八千自损一万的办法，可使用抗生素进行查杀，但是高浓度的抗霉菌素对细胞有毒性作用。

2. 把所有细胞从污染的CO2孵箱转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱(全部，尤其四个角)。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞；

3. 用0.5%新洁尔灭擦拭超净台和墙壁，确保不留死角，地面用新洁尔灭消毒液拖地。

4. 将环境彻底消毒，整个培养间高锰酸钾或者乳酸熏蒸,孵箱内部包括托盘等全部用苯酚搽洗,封闭2天。

真菌污染预防方法：

1)，将细胞移出来，用微量硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里加适量硫酸铜或者酸氢二钠高盐液体防止霉菌

2)孵箱应定期清洁，大约一个月左右清洁一次，

3)可在培养基里加两性霉素或制霉菌素)或[放线菌素D或双抗进行预防。

4)最主要的还是要培养良好的无菌观念，实验室尽量不要大声说话，佩戴好口罩，手套，操作时应小心，避免培养基撒入培养箱以及生物安全柜，这些撒入培养箱的培养基为细菌及真菌的繁殖提供了很好的条件。