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简述几种常用基因突变检测方法的基本原理
来源:启达生物 浏览量:875 发布时间:2023-11-23
基因突变是导致遗传性疾病或癌症等疾病发生的主要原因之一。检测基因突变能够促进疾病的早期诊断和治疗。下面简述几种常用的基因突变检测方法及其基本原理。
1. Sanger测序法
Sanger测序法是目前应用最广泛的基因突变检测方法之一。其基本原理是利用DNA聚合酶、引物、dNTP以及缺少一种ddNTP(随机的一种,在PCR扩增过程中可替代dNTP参与DNA链合成反应)构建DNA扩增体系。在聚合过程中,随机的ddNTP会在某个位置上被插入DNA链,从而阻止DNA链的继续延伸。通过这种方法,可以生成一系列长度不同的DNA碎片。将这些DNA碎片分别进行荧光标记并电泳分离得到荧光带,最终可得出突变位点所在的DNA碎片。
2. 等温扩增技术
等温扩增技术是一种恒温下DNA扩增的方法。其基本原理是利用异链替换酶、聚合酶和RNA剪切酶等多种酶基于循环式DNA扩增机制,在恒温条件下完成DNA扩增的过程。在等温扩增过程中,通过设计合适的引物,可以在RNA剪切酶的作用下产生长度不同的RNA片段。通过对这些RNA片段的检测,可以分析出DNA序列中的特定突变。
3. 聚合酶链式反应技术
聚合酶链式反应(PCR)技术是最常用的DNA扩增方法之一。其基本原理是通过引物诱导DNA聚合酶催化多轮DNA复制过程,将少量的DNA扩增到足够的数量以便进行检测。在PCR反应过程中,引物的设计需要确保其与目标DNA序列高度特异性的结合,以避免与其他DNA序列的杂交发生。PCR扩增过程的终止通常由DNA聚合酶的离开或核酸内切酶的作用结束。可以用PCR技术检测存在于目标DNA序列中的特定突变。
碱基扩增技术是一种基于聚合酶的DNA扩增方法。其基本原理是通过PCR扩增,将包含某个特定碱基的DNA扩增至足够的数量,然后与T7RNA聚合酶合成特定的RNA产物。此后利用核酸杂交技术在固定于膜上的碱基序列探针与RNA产物之间进行杂交反应,对RNA探针与被锚定的DNA引物进行探测,以确定其扩增产物是否存在特定的突变。通过这种方法可以实现对单一碱基缺失和插入突变的检测。
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