冻存细胞的这些坑，你踩过吗？

冻存细胞的错误的时机主要有：细胞量太少，细胞状态不好，细胞变形严重，或者细胞生长堆积，一旦生长过平顶期，培养基就会变得很黄，细胞可疑污染；镜下观察细胞有很多碎片或者不明物；培养时间过长，连续培养超过二个月，细胞性状已有改变）。

解决方法：选择细胞冻存的最佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好，复苏后两周内。

1. 细胞太少：冻存时细胞浓度低于 1-5×1000,000/ml。（复苏很难成功）。原因：细胞和细胞间会又间隙接触反应, 解决：离心后调整细胞浓度，把细胞种更小的孔板中

2. 培养基很黄时，冻存复苏后几天不长：在细胞生长平顶期冻存的细胞会在解冻后有几天停滞状态，原因：细胞在生长平顶期已经停止生长，冻存后也保持互相间抑制的信号，解决办法：用胰酶消化重新铺板；

3. 细胞污染：冻存管的盖子一定要拧紧，否则复苏水浴时会渗水，造成污染。复苏细胞的时候尽量避免冻存管接缝处沾水。

4. 程序降温盒导致的细胞复苏不活：放在－80 度的冻存盒，壁太薄，细胞在被迅速降温，使用普通的冻存液抗氧化和抗冻添加物不够，导致细胞内产生大量冰晶杀死细胞.

解决办法：使用上海启达免程序细胞冻存液含血清（货号：SD0001）或免程序无血清冻存液（货号：SD0002）成品冻存液，含有抗氧化因子，可在细胞冻存时防止细胞产生氧化反应，给细胞一个完美的休眠环境，含有抗冻组分，让大部分细胞免受冰晶杀戮。

5 . -80 度太久导致细胞状态不好，原因：冰箱的温度难以恒定：开门 / 关门，电压不稳等.解决办法：尽快转入液氮。

6. 液氮不足：液面不能漫过所有细胞。解决：定期测量液氮储备，保证细胞全部浸在液面下，小提醒：有几个细胞需要气相保存的，不能浸入液氮里，挪细胞的时候需要注意一下。

7. 取错细胞：找不到 / 拿错冻存管。原因：没有标记好细胞，没有做好库存记录，解决：每支冻存管都标上细胞的名称，冻存时间，并记录在册。