一眼就会的裸鼠成瘤操作

细胞株移植瘤模型（cell derived xenograft, CDX)，即将体外传代培养的肿瘤细胞接种至免疫缺陷小鼠，裸鼠皮下荷瘤是指将人源或鼠源细胞注射到免疫缺陷的裸鼠皮下,通过其它条件来验证肿瘤的形成、发展及抗肿瘤药物的效果。

肿瘤细胞有良性和恶性之分；癌细胞则是恶性，是会扩散的细胞。肿瘤细胞包含癌细胞，它们共同特点是从基因⽔平上失控的、能⽆限增殖的细胞。癌细胞有三个显著的基本特征即：不死性、迁移性并且不会发生接触抑制反应。

常规较容易成瘤的细胞 ：

Hep-G2（肝癌），NCI-H460(⼤细胞肺癌)，97H（人肝癌细胞） 4T1(小鼠乳腺癌）SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌）SKBR3， A375/B16-F10（⼈⿊⾊ 素瘤细胞）， ，H1299（肺癌）， SPC-A-1（肺腺癌）， HT-29/HCT116（结肠癌）MDA-MB-231 乳腺癌 ， CT26 （⼩⿏结肠癌细胞 ），U87 （⼈胶质瘤细胞） ， PC-3 （⼈前 列腺癌细胞）等

常用的小鼠表型：

荷瘤裸鼠选择：

4-6周龄BALB/c-nu裸小⿏

操作步骤：

1.取处于对数⽣长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜.

2.胰酶消化细胞后⽤预冷的PBS洗1-2遍，以去除细胞中残余的⾎清。

3.⽤PBS或者0.85%生理盐水吹打细胞沉淀⾄合适的浓度，⼀般⽪下瘤接种的细胞量为1-5×106个细胞/⽀，接种体积为0.1-0.2ml，因此细胞悬 液的浓度为1-5×107个细胞/ml，细胞消化后应尽快接种到裸⿏⽪下，⼀般尽量在半⼩时内完成（如果接种量⼤，可以分批接种），途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢以 保持细胞的活性。

4.抓住小鼠的尾巴（远离尾端），提起小鼠，抓住它的前脚，左⼿拇指和⾷指捏紧裸⿏颈背部⽪肤，⼩拇指夹住裸⿏尾巴；以方便注射，注射种植部位选择⾎供丰富区域，如腋窝中后部。如果被咬，不要将动物从手上扔下来因为摔倒会伤害动物并导致动物死亡以及将来可能出现的细菌和病毒的遗留污染，

将老鼠从手指上移开的最佳方法是：

把你的手放回笼子里。这为小鼠提供了回家的路，它就会从你的手指跳下来回到笼子里。

5. ⽤枪将细胞悬液充分的吹散后接种，接种时，针头在⽪下进针深⼀点，约1cm深，针头在⽪下左右滑动⼏次，以便细胞接种成团，减少注射后细胞悬液从针眼溢出。

6. 根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量，⼀般⽪下成瘤的周期为1-2个⽉。肿瘤不宜⽣长过⼤，⼀般不要超过2000mm3，肿瘤⼤⼩测量⼀般为1周两次，游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。V=1/2ab2 (a为长轴，b为短轴)

裸鼠荷瘤可能遇到的问题：
1.瘤块长起来⼜消失？

肿瘤块先缩⼩，后变⼤很常见，很可能是炎症反应，肿瘤细胞被⼩⿏⾃⾝吸收，继续观察肿瘤细胞吸收之后是否经过⼏周还能长出来，长不起来建议换⿏

2.是否可以在⼀只⼩⿏进⾏多个点接种?

不可以，⼀只⽼⿏就只能接种⼀个点，因为⼀个⽼⿏⾝上有多个肿瘤块的情况下，可能会相互影响。

3.肿瘤长不出来是怎么回事？

⼀：肿瘤⽣长周期很慢，⼀周开始⽣长肿块，⼤约需要1~2个⽉才能长成肿瘤； ⼆：可能是细胞状态差，活⼒不好，或是肿瘤细胞不易成瘤，需加⼊基质胶辅助(基质胶：PBS=1:1)或增⼤接种量或更换细胞系；

三：⼀⽅⾯可能是⼩⿏周龄太⼤，或⼩⿏免疫排斥，建议更换免疫缺陷程度更⼤的⼩⿏（Nod-scid⼩⿏）。

4.肿瘤体积相差很⼤，⼤⼩不⼀？

⾸先，并不是所有的肿瘤都能够长得均⼀形态。其次，这可能跟⼩⿏周龄及接种细胞量不⼀致导致，建议重新接种.

5. 皮下或皮内肿瘤生长迅速，或生长到一定的大小后出现溃疡和坏死现象?

考虑小动物感染原因造成，可对小动物提供支持治疗预防感染的抗生素，可在小动物饮用水中施用抗生素（和其他药物）原因如下：

-药物在水中的稳定性。

-小鼠喝水得以治疗。

若小动物全身出现坏死和溃疡作为皮下或皮内自然生长模式的一部分肿瘤，长度低于1.5cm，导致皮肤破裂或渗出（液体或血液积聚）持续超过48-72小时而不闭合“伤口”通常需要对小动物进行安乐死处理。