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珍藏版-细胞免疫荧光爬片操作步骤

来源:启达生物  浏览量:3683  发布时间:2022-09-22


 

在哺乳动物细胞研究中,常常要做细胞免疫荧光启达生物为你整理了细胞免疫荧光爬片的操作步骤,点赞收藏,下次实验就不至于手忙脚乱了。

DAY 1

  1.将盖玻片用洗洁剂清洗干净,然后用自来水将洗洁剂冲干净,再用纯水冲洗三遍,泡在75%的酒精中静置10min

  2.用镊子夹起24mm*24mm盖玻片在酒精灯上将酒精烧干,温度不可太高。

  3.将烧干的盖玻片放在六孔板中,待冷却后将细胞悬液(约1-2×104个细胞)滴加在盖玻片上。

4.5h后轻轻补加1ml培养基,置37℃ 5%CO2 培养箱中培养过夜,细胞贴在玻片上良好生长。

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Humsc细胞染色(启达生物,货号:CD5007)

 DAY 2

1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min;

 

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次,每次3min;

 

3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤);

 

4. PBS浸洗玻片3次,每次3 min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加正常山羊血清,室温封闭30min;

 

5. 吸水纸吸掉封闭液,不洗,每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒,4℃孵育过夜;

DAY 3

6. 加荧光二抗: PBST 浸洗爬片3次,每次3min,吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中20-37℃孵育1h,PBST浸洗切片3次,每次3min;注意:从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

 

7. 复染核:滴加DAPI避光孵育5min,对标本进行染核,PBST 5minx4次洗去多余的DAPI;8. 用吸水纸吸干爬片上的液体,用含抗荧光淬灭剂的封片液封片,然后在荧光显微镜下观察采集图像。

注意事项:

1 .取细胞爬片时,动作应轻柔,防止将细胞爬片夹碎,影响实验进程。

 

2.种细胞过程中,要注意将细胞轻柔混匀,“八”字或者“十”字形摇晃,防止细胞局部生长过密。

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