珍藏版-细胞免疫荧光爬片操作步骤

在哺乳动物细胞研究中，常常要做细胞的免疫荧光染色，启达生物为你整理了细胞免疫荧光爬片的操作步骤，点赞收藏，下次实验就不至于手忙脚乱了。

DAY 1：

　　1.将盖玻片用洗洁剂清洗干净，然后用自来水将洗洁剂冲干净，再用纯水冲洗三遍，泡在75%的酒精中静置10min。

　　2.用镊子夹起24mm*24mm盖玻片在酒精灯上将酒精烧干，温度不可太高。

　　3.将烧干的盖玻片放在六孔板中，待冷却后将细胞悬液（约1-2×104个细胞）滴加在盖玻片上。

4.5h后轻轻补加1ml培养基，置37℃ 5%CO2 培养箱中培养过夜，细胞贴在玻片上良好生长。

Humsc细胞染色（启达生物,货号：CD5007)

　DAY 2：

1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；

3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；

4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；

5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；

DAY 3：

6. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

7. 复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5minx4次洗去多余的DAPI；8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。

注意事项：

1 .取细胞爬片时，动作应轻柔，防止将细胞爬片夹碎，影响实验进程。

2.种细胞过程中，要注意将细胞轻柔混匀，“八”字或者“十”字形摇晃，防止细胞局部生长过密。