Opt™G418溶液

G418是一种氨基糖苷类抗生素，常用于分子遗传试验中作为抗性筛选试剂。其筛选浓度取决于所使用的细胞类型，例如：

• 筛选哺乳动物细胞时，推荐起始筛选浓度为400微克/毫升。‌

• 筛选植物细胞时，推荐起始筛选浓度为10微克/毫升。

• 筛选酵母细胞时，推荐起始筛选浓度为500微克/毫升。

确定最佳筛选浓度通常通过杀灭曲线（kill curve）来确定，即通过逐步增加G418的浓度，观察细胞死亡的情况，找到能够杀死所有细胞的最小G418浓度。例如，在筛选CHO细胞时，推荐的G418浓度范围为200-2000微克/毫升。‌

在实际操作中，可能需要通过实验来确定具体的最佳筛选浓度，因为不同细胞类型和生长条件下，G418的用量可能会有所不同。例如，在筛选CHO细胞时，推荐的G418浓度范围为200-2000微克/毫升，而筛选植物和酵母细胞的推荐浓度分别为10-100微克/毫升和500-1000微克/毫升。

1.制备筛选培养基：确定G418的最佳筛选浓度需要考虑细胞类型、生长条件以及其他环境因素，并通过实验来确定具体的浓度范围，在细胞进行慢病毒感染前用不同浓度的G418培养细胞：

2.复苏细胞：将细胞传2-3代，待细胞生长稳定后，再传代，计数，大约2000个/孔铺板于24孔培养板中

3. 以哺乳动物细胞筛选为例：

1. 用培养基将G418溶液稀释为0 ug/ml、400 ug/ml、500 ug/ml、600 ug/ml、700 ug/ml、800 ug/ml、900ug/ml、1000ug/ml、1100ug/ml、1200ug/ml24孔板，每孔1ml培养基（含有G418的完全培养基），每个浓度3-4个重复.

2. .12小时后换液，将培养孔中培养基吸除，PBS洗涤一次，每孔加入不同浓度筛选培养基，隔天更换一次筛选培养基，培养10-14天，以最低细胞全部死亡浓度为基准。

确定G418浓度后开始感染细胞：

3. 将需要感染的细胞铺6孔板（20万/孔），第二天转染，6小时后换新鲜正常培养基。转染24小时后加最佳筛选浓度G418培养基，隔天换液。

4. 换液一两次后（换液后培养过夜），细胞达50%-80%时，吸出所有培养液，离心3000-4000rpm，弃上清，加入2倍体积新鲜最佳筛选浓度培养液，0.22um过滤，混匀4℃备用。

5. 培养6天左右细胞大量死亡时，可以换用适应性培养基，即5中所配制。或者可以增加血清浓度培养，例如原来用10%血清，此时则可以采用20%血清。

6. .培养10天后将G418浓度减半，维持筛选压力。

7. 筛选约14天后可见有抗性xx细胞出现，采用单克隆法或者刮除阴性克隆进行细胞的培养和扩增

备注：产品仅供科研使用